Александр Александрович Максимов - Василий Николаевич Манских
Тотальные препараты из культур соединительной ткани после фиксации по Карнуа Максимов предпочитал окрашивать слабым раствором гематоксилина Делафильда, оставляя культуральные покровные стекла плавать на его поверхности культурой вниз на 24 часа {57}, после чего сутки отмывал в воде, слабо подкрашивал эозином и заключал в бальзам.
Пожалуй, наиболее часто Максимов использовал метод окраски железным гематоксилином по Гейденгайну, конечно, ввиду своих универсальных цитологических возможностей. Он применял ее (после фиксации сулемой[76] и сулемовыми смесями) как обзорную окраску для выявления клеток соединительной ткани на срезах и в пленках и для обнаружения клеточных органелл (после сулемы – для окраски центросом, реже, после ценкер-формол-осмия – для митохондрий). Пропись этой окраски в том виде, как она практиковалась в лаборатории Максимова, можно найти в диссертации Н. П. Солухи.
«С гематоксилином (EH) поступают следующим образом: приготовляют водный 0,5 % раствор гематоксилина и оставляют его „зреть“ дней на 20. Препарат предварительно окраски гематоксилином протравляется часов 12–20 в 1 1/2% водном растворе амьячно-железных квасцов (Ferrum sulfuricum ammoniatum axydatum), затем промывается быстро в дистиллированной воде и оставляется в растворе гематоксилина часов на 24 или 48. После этого препарат быстро промывают в дистиллированной воде и обесцвечивают в том же растворе железных квасцов, причем степень обесцвечивания контролируется под микроскопом. Затем следует тщательно промыть в проточной воде и провести через спирт, масло[77], ксилол и бальзам» [112, C. 14].
У Солухи мы можем обнаружить и описание окраски полихромной метиленовой синью по Унна – метода, также использовавшегося Максимовым в работах о воспалении {28, 31}.
«Полихромной синькой (Methylenblau nach Unna от [фирмы] Grübler’a)[78], (Mb) предварительно фильтрованной красят Z [фиксированные семьсю Ценкера] препараты в течение 24 часов, Zf [фиксированные максимовским ценкер-формолом]-препараты – 20 минут, и фиксированные жидкостью Dominici[79] 5 или 10 минут. После окраски препарат промывают водой и быстро (1/2 минуты) дифференцируют в свежеприготовленном растворе глицериново-эфирной смеси Unna[80] в воде – несколько капель на часовое стеклышко воды, после чего препарат хорошо промывают в воде, так как следы оставшейся глицерино-эфирной смеси могут со временем обесцветить уже готовый окрашенный препарат при его дальнейшем хранении. Промывать достаточно минут 15 с частой меной воды. Затем препарат обезвоживают 96° спиртом, переносят в бергамотовое масло и проводят через ксилол в бальзам» [112, C. 14].
Для окраски коллагена в ранних работах Максимов использовал хорошо известный метод ван Гизона (с гематоксилином Вейгерта, после фиксации смесью Ценкера) {22}, в поздних – азан Гейденгайна после ценкер-формола {82, 90}. Ретикулин он окрашивал (импрегнировал) после ценкер-формола по Бильшовскому, эластику – орсеином с докраской гематоксилином {82, 90}. Особенности применения этих методов в максимовской лаборатории неизвестны, возможно, они выполнялись так, как описано в книге С. С. Чашина [47].
Митохондрии (хондриосомы) Максимов предпочитал окрашивать по методу Кулля после фиксации по Шампи – кислым фуксином Альтмана на анилиновой воде[81], тионином и ауранцией (в ранних работах применялся также обычный метод Альтмана) {57–60, 78}, описание которого можно найти в любом крупном руководстве ХХ в. по микроскопической технике. Результат метода очень красив – митоходрии окрашиваются в насыщенно-красный цвет, ядра – в светло-фиолетовый – и все это на фоне бледно-желто-коричневой цитоплазмы и межклеточных структур. Проблема воспроизведения этой методики заключается в том, что достать оранжево-желтую краску – ауранцию – сегодня практически невозможно[82]. В диссертации Максимова упоминается также метод Бенда (см. у Б. Ромейса [100, 183]), но далее он им практически не пользовался (вероятно, из-за капризности процедуры).
«Сетчатый комплекс» Гольджи Максимова интересовал мало. В его работах есть лишь три оригинальных рисунка этой органеллы, выявленной импрегнацией осмием (правда, два из них по-своему уникальны, поскольку изображения аппарата Гольджи, окрашенного классическими методами в лимфоидных клетках, найти очень трудно) {88}. На одном из этих рисунков показан препарат лимфоидных клеток с одновременной окраской митохондрий и «сетчатого комплекса». Этот препарат был приготовлен с помощью импрегнации осмием по методике Колачева – Насонова (см. руководства по микротехнике [100, 183]) в комбинации с методом Кулля.
Гистохимические методы в работах Максимова весьма немногочисленны. Мелкие жировые капли в клетках он выявлял, применяя методы фиксации в растворах, содержащих осмий (жидкости Под-высоцкого, Альтмана, Шампи, ценкер-формол-осмий), при которых жир окрашивается в черно-коричневый цвет и хорошо сохраняется на препаратах после заливки в парафин или в целлоидин. Для окраски крупных жировых включений Максимов использовал шарлах красный (это то же самое, что и судан IV) и нильский синий после фиксации формалином {57}. Плазмоциты он выявлял метиловым зеленым-пиронином {22}. Эти методы им не описаны, но, по-видимому, они мало отличались от тех прописей, которые можно найти в микротехнических руководствах [47, 48, 54, 100, 183]. То же относится и к выявлению амилоида окраской метиловым фиолетовым после фиксации этанолом {2, 3, 10} и муцинов – толуидиновым синим (после фиксации сулемой) {21}, с тем лишь замечанием, что препараты следует обязательно рассматривать в капле воды, поскольку диагностически значимое явление метахромазии проявляется в воде значительно ярче, чем после процедуры заключения в бальзам.
В работах по туберкулезу Максимов прибегал и к окраске микобактерий по Цилю – Нильсену. Он нагревал наклеенные целлоидиновые срезы в фуксине Циля на малом пламени спиртовки до появления паров, оставлял остывать на 30 минут, затем дифференцировал в 1 % соляной кислоте на 70° спирте 30 секунд, 10–24 часа отмывал от кислоты в воде, еще сутки докрашивал разведенным гематоксилином Делафильда, отмывал от него в воде 10–20 часов, окрашивал азур-эози-ном и заключал в бальзам {70, 75}. Банальные бактерии (стафилококки) при исследовании гнойного воспаления он окрашивал обычным способом Грама и полихромной метиленовой синью по Унна {28}.
К методике Эрлиха – Бионди («триацидная смесь» растворов метилового зеленого, кислого фуксина и оранжа Ж), ныне забытой, а тогда очень распространенной гематологической и в меньшей степени обзорной окраске Максимов прибегал очень редко {21}. Этот исторический метод (которым П.
